从2019年爆发新冠以来，核酸检测对大众来说已经快变成日常生活的一部分了，而且目前对绝大多数人来说，其重要性几乎可以和吃饭睡觉相比。核酸检测技术越来越为广大人民所熟悉。不知道大家想过没有，检测人员面对成千上万管样本和步骤繁琐的检测步骤，如何保证整个实验过程中样本不会出现混淆、差错、污染和交叉污染？前段时间出现的假阳性报告到底是什么情况？其实说到底，这些都和实验室管理有关。医院及检验所的核酸检测系统自动化程度较高，出错的概率还是极低的，即便如此，一旦出现了问题，还是会造成极其严重的后果和极其恶劣的影响。因此，实验室中对检测过程的监管成为一项重要工作。

 

科研工作者在实验中经常需要操作数量较多的样本，确保样品不污染不混淆是非常重要的。作为一家生物科研服务公司，欧易技术实验中心主要为广大科研工作者提供技术服务，每天处理的样本有几千份，那么我们是如何保证这些样本不出差错呢？

 

在质量管理体系中有要求：做我所写，写我所做。我们的实验人员在大量的实践中摸索出了一套自己的方案，来防止各种错误，可以更好的为客户提供优质可靠的服务，让客户放心。

下面以一个流程相对简单的项目的执行过程为例给大家做个介绍。

 

实验前准备

 

每次实验前先将实验中所需的试剂和仪器准备好：各类仪器打开，提前30min将磁珠由4℃冰箱取出平衡至室温，试剂提前解冻，标记好当天实验要用到的所有样本管。当然，最重要的事情是核对好当天要开展实验的样本，样本核对使用清单，核对一个标记一个，按照顺序摆放好。

 

图1 | 样本名与任务单一一核对

 

实验中

 

（1）转移样本：

 

这个步骤是把1.5ml样本管中的核酸样本转移到八连管中，便于后续的排枪操作。将八连管标记好顺序，把样本按照图2的对应顺序逐一从1.5ml 样本管中转移需要体积的样本到对应编号的八连管内，每加完一排后将八连管与对应样本管拍照记录，有几排样本，需要拍几张照片，如做到第四排，则是第四张照片（图3）：
 

图2 | 加完第一排样本

 

图3 | 加到第四排样本

 

（2）PCR程序选择及试剂配制：

 

样本取好之后，先在PCR仪中将要使用的PCR程序调出，拍照确认所选程序正确（图4）。之后进行PCR试剂的配制：将提前解冻的试剂按照SOP上的顺序摆放好，如遇到管盖颜色相同的，一定要看清楚试剂名称，确认试剂无误，拍照（图5）。

 

图4 | PCR程序调用

 

图5 | 试剂按加样顺序摆放

 

（3）纯化：

 

PCR程序完成后，样本需要进行磁珠纯化，纯化磁珠提前转移需要的体积到96孔板中，再将样本按照顺序加到对应的96孔板中，与磁珠混合，样本转移前后均拍照确认（图6，图7）。

 

图6 | 第一排样本与磁珠混合

 

图7 | 纯化细节

 

（4）加接头及barcode：

 

barcode是测序时用于区别样本的一段序列，一般由6碱基或8碱基组成。因为该序列是用来区分样本的，所以这个步骤是整个实验过程的重中之重，为确保接头信息无误，加完一排盖一排；全部加完后拍照，检查时查看接头体积大小。

图8 | 样本及接头摆放

 

图9 | 完成加接头及barcode

 

（5）文库转移：

 

建好的文库纯化结束后需要从纯化用的96孔板中转移至新的八连排内；转移完一排盖一排，防止加串排。

 

图10 | 吸取纯化板中的样本

 

图11 | 转移至新的八连管中

 

图12 | 吸取第二排纯化板中的样本 

 

图13 | 转移至第二排新八连管，第一排的样本管盖已盖好

 

（6）文库转管：

 

由于八连管不便于标记，所以还需要将八连管中的文库再转移到标记好的1.5ml样本管中，转移完成后将八连管和1.5ml样本管摆好拍照确认。

 

图14 | 八连管中的文库和标记好的1.5ml管

 

图15 | 完成文库从八连管到1.5ml样本管的转移

 

以上就是一个项目的实验操作过程，每个步骤都进行记录和拍照，真正做到“做我所写，写我所做；做我所拍，拍我所作”。实验结束，将这些照片上传到电脑，既可用于复盘当天实验操作是否正确无误，也便于后续项目回顾查询，核对实验细节。

 

通过以上的各个步骤记录，欧易公司技术部确保了实验过程的严谨性，避免了样本混淆和差错，为客户提供真实可靠的实验数据。即使问题出现了数据异常，这些照片提供了快速排查的相关信息，可以迅速排除操作过程中的问题，使定位问题的速度更快，准确性更高，结果也更具有说服力。

 

这些防错小技巧，你学会了么？

 

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