膜体系筛库前，需对诱饵蛋白在酵母细胞中是否正确表达进行检测，即功能验证（functional assay），实验中用到的对照AD载体为pOst1-NubI。如果诱饵蛋白在酵母细胞中正确表达，并定位到酵母细胞膜上，同时与诱饵蛋白融合的Cub-LexA-VP16结构定位于细胞质侧，则其将与Ost1-NubI结构域互作，从而形成完整的泛素，激活报告基因表达。

 

实验设计

 

通过标准

Ø如果诱饵蛋白在该体系中正确表达，即构建的BD载体适应该体系，反应1在SD-trp-leu-his和SD-trp-leu-his-ade培养基上的生长率应达10%-100%。

Ø如果诱饵蛋白不存在自激活，反应2在SD-trp-leu-his和SD-trp-leu-his-ade培养基上应无显著生长。

 

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